ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ИНЖЕНЕРИЯ
(генная инженерия), создание с помощью
биохим. и (или) хим. синтеза генетич. структур, способных размножаться
и действовать в клетке-хозяине, изменять ее генетич. программу и синтезировать
требуемые продукты, обычно белки. Возникла в 1972, когда была получена
первая такая структура. Будучи новым этапом развития молекулярной генетики,
Г. и. использует достижения микробиологии, биохимии, биоорг. химии и молекулярной
биологии.
Представление о том, что носителем генетич. информации является ДНК,
возникло еще в 1944. Было известно также, что ген представляет собой отрезок
ДНК, кодирующий определенный белок, и что передача наследств. информации
между поколениями происходит посредством удвоения молекул ДНК. Но любым
манипуляциям препятствовала огромная молекулярная масса ДНК, составляющая
миллионы и миллиарды на клетку, и невозможность получать химически однородные
небольшие ее фрагменты. Положение изменилось, когда удалось обнаружить
и выделить два рода ферментов: 1) рестриктирующие эндонуклеазы (рестриктазы)
- они рассекают молекулы ДНК в пределах строго определенных нуклеотидных
последовательностей; их описано ок. 400, наиб. употребительны рестриктазы
Eco RI, Hind III, Bam HI, Pst I, Sal I и др. 2) ДНК-лигазы (прежде всего
фермент кишечной палочки, индуцируемый бактериофагом Т4), к-рые сшивают
двухцепочечные фрагменты ДНК, восстанавливая межнуклеотидные связи в местах
единичных разрывов. С помощью этих ферментов получают удобные для генетич.
операций фрагменты ДНК и соединяют их в единое целое. Для такого объединения
безразлично происхождение ДНК (химически у всех существ она одинакова),
между тем в природе объединению генетич. информации неродственных существ
препятствуют разл. межвидовые барьеры.
Конечный продукт генетич. манипуляций (рекомбинантные молекулы ДНК)
состоит из двух компонентов: изучаемого полинуклеотидного фрагмента (обычно
структурного гена) и вектора. В последовательности нуклеотидов гена закодирована
последовательность аминокислот белка. Ген м. б. выделен из прир. источника
с помощью рестриктаз, получен спец. методом посредством фермента обратной
транскриптазы или же синтезирован химически. Однако структурные гены как
таковые лишены регуляторных генетич. элементов и сами по себе не могут
функционировать в клетке-хозяине, т.е. умножаться в числе и обеспечивать
синтез белка. Функциональный компонент рекомбинантной ДНК-вектор, т.е.
специально сконструированная молекула, содержащая регуляторные участки,
а именно: начало репликации ДНК, генетич. маркеры, необходимые для селекции,
и др. элементы, нужные для сложного процесса реализации генетич. информации.
Большинство векторов получено на основе плазмид (небольших кольцевых молекул
ДНК бактерий), фагов лямбда и М13, вирусов SV40 и полиомы (для животных
клеток), плазмиды Ti из Agrobacterium tumefaciens (для клеток растений),
двухмикронной плазмиды пекарских дрожжей. Самый распространенный бактериальный
вектор-плазмида рВН 322 (мол. м. 2,6*106, маркеры - резистентность
к антибиотикам ампициллину и тетрациклину, единичные места расщепления
для рестриктаз Eco RI, Bam HI, Hind III, Pst I, Sal I). Структурный ген,
вырезанный из к.-л. ДНК с помощью определенной рестриктазы или комбинации
рестриктаз, соединяют действием лигазы с выбранным вектором и получают
кольцевидную рекомбинантную молекулу ДНК. Ее вводят в клетку-хозяина: это
бактерии (кишечная, сенная палочка и др.), дрожжевые, животные или растит.
клетки. Затем проводят селекцию -отбор клеток, содержащих рекомбинантные
ДНК, и получают клон, т.е. клетки, однородные по своим генетич. и иным
характеристикам. Размножением такого клона можно получить нужное кол-во
однородного генетич. материала и, при желании, конечного продукта-белка.
Г. и. стала основой развития молекулярной генетики. Благодаря возможности
клонирования чужеродных генов в бактериях, животных и растит. клетках (выделены
клоны мн. генов: рибосомной РНК, гистонов, интерферона и гормонов человека
и животных и т. п.), Г. и. имеет прикладное значение. Она составляет, наряду
с клеточной инженерией, основу совр. биотехнологии. С помощью методов Г.
и. получены мн. новые, иногда неожиданные данные, открыто, напр., мозаичное
строение генов у высших организмов, изучены транспозоны бактерий и мобильные
диспергированные элементы высших организмов, открыты онкогены и т.п. (см. Мигрирующие генетические элементы).
Лит.: Генетическая инженерия, под ред. А. А. Баева, ч. 1-2, М.,
1979-80 (Итоги науки и техники. Сер. Молекулярная биология, т. 12); "Ж.
Всес. хим. о-ва им. Д.И.Менделеева", 1984, т. 29, № 2; МаниатисТ., ФричЭ.,
СэмбрукДж., Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование, пер.
с англ., М„ 1984. , А. А. Баев.
|